1．目的：建立本公司化驗(yàn)室用Waters e2695高效液相使用與維護(hù)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，規(guī)范Waters高效液相的正確使用和校準(zhǔn)，保證測量結(jié)果正確無誤。

2．范圍：適用于本公司化驗(yàn)室Waters e2695高效液相的操作與維護(hù)。

3．術(shù)語：

4．職責(zé)：

化驗(yàn)室QC人員負(fù)責(zé)本規(guī)程的執(zhí)行；

質(zhì)保部長負(fù)責(zé)本規(guī)程執(zhí)行情況的監(jiān)督。

5．操作程序與方法：

5.1 儀器組成及電源：

5.1.1 儀器組成：本儀器由泵、進(jìn)樣器、紫外檢測器、柱溫箱和Empower色譜工作站組成。

5.1.2 電源：泵為220V穩(wěn)壓電源，檢測器為220V穩(wěn)壓電源，工作站為220V穩(wěn)壓電源。

5.2 外部硬件的操作：

5.2.1依次打開電腦、液相分離單元和檢測器電源，液相分離單元進(jìn)行開機(jī)自檢（注：打開順序錯誤可導(dǎo)致軟件與儀器連接不上）。同時檢查流動相和10%甲醇的體積是否充足。

5.2.2開機(jī)自檢后，"分離單元"將進(jìn)入Idle（空閑）模式。

5.2.3沖洗密封墊，主屏幕下按【Diag】→"Diagnosities"界面，按Prime Seal Wash顯示"Prime Seal Wash"屏幕，按【Start】，待排放口有水流出（氣泡排凈）時（約1分鐘），按【Halt】停止，按【Close】關(guān)閉界面。（注：10%甲醇足夠多）5.2.4沖洗進(jìn)樣針，按Prime Ndl Wash 顯示"Prime Ndl Wash"屏幕，按【Start】，待自動停止。清洗兩次，按【Close】關(guān)閉界面。（注：可配制與實(shí)驗(yàn)用流動相相同溶液）

5.2.5濕法灌注：按【Exit】退出"Diagnosities"界面，按【Menu/Status】，進(jìn)入"Status（1）"屏幕，在"Compomtion"中對所灌注的管路輸入100%，按【Direct Function】，光標(biāo)選"Wet Prime"，按【Enter】，顯示"Wet Prime"后按【OK】，待結(jié)束后，依次重復(fù)操作對所用管路（A/B/C/D）進(jìn)行灌注。

5.2.6沖洗自動進(jìn)樣器，在"Status（1）"屏幕下，按【Direct Function】，光標(biāo)選"Purge Injector",按【Enter】，顯示"Purge Injector"界面，按【OK】。

5.3點(diǎn)開Empower Pro軟件圖標(biāo),進(jìn)入操作界面。

5.3.1 單擊鼠標(biāo)左鍵進(jìn)入"配置系統(tǒng)"。選中"項目"后，單擊 "新建項目"。 出現(xiàn)"新建項目向?qū)?，"表空間"中接受50MB的表空間缺省設(shè)置。在該向?qū)Р襟E中，系統(tǒng)默認(rèn)設(shè)置了"支持全面審計追蹤"。如果不需要，可取消"支持完全審計追蹤"復(fù)選框，以取消對項目元素（如方法和樣品）所做的所有修改的記錄。如需要，則選中該復(fù)選框之后，還再選擇是否需要對"方法變化"、"結(jié)果變化"、"樣品信息變化"和"刪除"的更改進(jìn)行注釋。單擊"下一步"。"選項"頁中，選擇用于本項目的選項。單擊"下一步"。"訪問控制"頁中，根據(jù)需要選擇設(shè)置對您所創(chuàng)建的項目具有訪問權(quán)限的用戶和用戶組或者接受缺省的選項，然后單擊"下一步"。 在"復(fù)制"中，接受默認(rèn)的選項，然后單擊"下一步"。在"輸入名稱"頁中，輸入項目的名稱，必要時輸入注釋內(nèi)容。最后單擊"完成"來結(jié)束新項目的創(chuàng)建。 項目列表中出現(xiàn)新建的項目名稱。

5.3.2 分析方法的建立：單擊命令欄上的View Method，如果出現(xiàn)"New Processing Parameters"頁，選擇 LC，然后單擊 OK。單擊命令欄上的 Instrument Parameters。 儀器參數(shù)出現(xiàn)在"View Method"工作區(qū)中，在此頁面下，點(diǎn)擊"Pump"設(shè)置：A泵流速、B泵流速、總流速以及柱溫，柱壓上限一般設(shè)在3500，下限一般設(shè)在70。再點(diǎn)擊"UV Detector"設(shè)置：波長、單雙波長。 從"File"菜單中選擇 Save As。"Save current method"對話框?qū)⒊霈F(xiàn)，在"Name"文本框中輸入"方法名稱"，在"Comments"文本框中輸入有關(guān)該方法的注釋（可選），然后單擊Save。

5.3.3 平衡系統(tǒng)：單擊采集欄上的 (Equilibrate)。采集欄上"Status Information"部分將顯示系統(tǒng)平衡的狀態(tài)。從下拉列表中選擇"自己方法名稱"，然后單擊 Equilibrate。為系統(tǒng)留出大約30分鐘以上時間進(jìn)行平衡，或直到基線穩(wěn)定。

5.4測定操作：

5.4.1 單針進(jìn)樣，可以單擊左下角的圖標(biāo)，出現(xiàn)以下"單針進(jìn)樣參數(shù)"對話框：在Method 下拉菜單中，可以選擇指定的儀器參數(shù)，在所有參數(shù)設(shè)定完畢后，即可單擊"Inject"鍵開始進(jìn)樣。同樣可以通過圖標(biāo)終止進(jìn)樣。

5.4.2 樣品組進(jìn)樣，a．在"方法組"下拉菜單中選擇欲使用的方法組，同時在下方的"儀器方法"下拉菜單中，選擇欲使用的儀器方法。。b. 在sample set 表單中，逐行填寫"Sample Name"、"Function"以及"Method"與"Run Time"、"Inj of Vail"" ＃ of Injs"后，即可點(diǎn)擊圖標(biāo)。c. 一旦點(diǎn)擊圖標(biāo)后，會出現(xiàn)如下"Run Sample Set"對話框：在對話框中寫入樣品組的名稱，然后點(diǎn)擊"Run"，即可運(yùn)行樣品組。d. 如果運(yùn)行中需要終止樣品組的運(yùn)行，可點(diǎn)擊圖標(biāo)，終止運(yùn)行。

5.5 數(shù)據(jù)的處理

5.5.1 利用向?qū)Ы⑻幚韰?shù)

a．在Find Data中的選中要處理的樣品，單擊（Review，查看）圖標(biāo)，打開數(shù)據(jù)。

b. 單擊（處理方法向?qū)В琍rocessing Method Wizard），出現(xiàn)對話框。

c. 選擇"Start New Processing Parameters" （建立新的處理參數(shù)）。然后單擊"OK"。

d. 如果出現(xiàn)下面的對話框，選擇"LC"，然后單擊OK。

e. 在"Integration－Integration Region"頁面中，在空格中輸入，或者在圖上用鼠標(biāo)左鍵拖拽來選擇積分的起止時間，然后單擊"Next"。

f. 出現(xiàn)"Peak Width and Threshold"頁面，接受默認(rèn)的數(shù)值，不作改動，單擊"Next"。

g. 在"Peak Rejection"頁中，根據(jù)需要設(shè)定最小面積和/或者最小峰高（也可不設(shè)），然后單擊"Next"。

h. 在"Calibration－General"頁中，選擇定量的方式：Area，校正曲線的擬合方式：Linear（線性）。然后單擊"Next"。

i. 在"Name" 欄中編輯組分名稱（注意，此處的名稱必須與在前面"Alter Sample"中所輸入的名稱一致）。然后單擊"Next"。

j. 在此頁面中，不作任何改動，單擊"Next"。

k. 在此頁面中，選擇校正的類型（type of Calibration），如為外標(biāo)法，選"External Standard Calibration"，單一內(nèi)標(biāo)法（即較為常用的內(nèi)標(biāo)法）選擇"Single Internal Standard",并在下拉菜單中選擇內(nèi)標(biāo)峰，然后單擊"Next"。

j. 出現(xiàn)"Method Name"頁，輸入方法名稱，必要時輸入注釋（Comments）。單擊"Finish"完成向?qū)А?/p>

k. 單擊 (Save all)保存全部。

5.5.2 定量計算

a． 回到"Find Data"的Channel選項卡。

用鼠標(biāo)選擇標(biāo)樣以及未知樣品（注意一定要先選擇標(biāo)樣，再選擇未知樣），然后單擊右

鍵出現(xiàn)快捷菜單，選擇Process。出現(xiàn)如下窗口：在Peocess中，選"Use specified method"（使用指定的方法），并在下拉菜單中選擇剛才利用向?qū)Ы⒌姆椒?。單?OK"。

b．到"Results"（結(jié)果）選項卡中，單擊"Updata"鍵更新結(jié)果。

c. 選中欲瀏覽的結(jié)果，單擊（Review，查看），出現(xiàn)查看主窗口，在色譜圖下方的"Peak"表中，"Amount"欄中，即可看到定量的結(jié)果。

d. 單擊工作欄中的（Calibration Curve，校正曲線），打開校正曲線窗口。

窗口的上部為曲線的方程等內(nèi)容?？赏ㄟ^下拉菜單查看不同組分的相關(guān)信息。

5.5.3數(shù)據(jù)的打印

1. 在"Results"選項卡中選擇欲打印的結(jié)果，單擊（預(yù)覽出版）。出現(xiàn)"打開報告方法"對話框?？梢赃x擇選擇"Use a Report Method that was generated to appropriate for the selected data（使用對選中的數(shù)據(jù)適用的報告方法）"，或者在"Use the following Report Method(使用以下的報告方法)"下拉菜單中選擇適當(dāng)?shù)膱蟾娣椒?例如LC Calibration Report，LC校正曲線

報告)，然后單擊"OK"。

2. 預(yù)覽無誤后，可單擊，進(jìn)行打印。

5.6關(guān)機(jī)操作：

5.6.1全部測定完畢后，按規(guī)定用適當(dāng)溶劑沖洗泵、進(jìn)樣閥、色譜柱和檢測器。

5.6.2關(guān)閉檢測器、泵及其他部件電源并拔下各插頭，做好使用登記。

5.7維護(hù)與保養(yǎng)：

5.7.1試驗(yàn)所用的流動相應(yīng)經(jīng)過0.45μm的膜過濾,以降低色譜柱受污染的程度,延長使用壽命。

5.7.2試驗(yàn)前先打開電源穩(wěn)壓器,待電壓穩(wěn)定后,方可打開儀器開關(guān)。

5.7.3色譜柱最高工作壓力一般不能超過3500。

5.7.4檢測器的光源具有一定的使用時間，所以每次在進(jìn)樣品前半小時左右打開，試驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)先關(guān)閉檢測器電源。

5.7.5最后一次進(jìn)樣完成后，應(yīng)用流動相沖洗一段時間，以保證洗脫完全，然后用純水沖洗約半小時，以除去流動相中的無機(jī)鹽類。

5.7.6最后用甲醇對色譜柱進(jìn)行再生保存。

5.7.7操作者應(yīng)細(xì)心了解儀器各部件性能。

5.7.8每次操作完畢后，應(yīng)及時清理所用物件，倒掉廢瓶中的廢液，用柔軟的抹布擦拭儀器表面，保持儀器的清潔。

5.7.9若儀器長時間不用，可定期加電，使儀器預(yù)熱一段時間，以免儀器內(nèi)部件受潮。

5.7.10為保證檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠，每年應(yīng)由計量部門負(fù)責(zé)校驗(yàn)一次。

5.8數(shù)據(jù)安全與備份管理

5.8.1 實(shí)驗(yàn)員使用前，首先必須分別授權(quán)軟件的使用賬號和密碼，并且確保防止泄露。不同實(shí)驗(yàn)員對應(yīng)不同賬號，不得共享。

5.8.2 未經(jīng)質(zhì)保部經(jīng)理允許，任何人不得私自修改儀器參數(shù)、方法參數(shù)。

5.8.3 每3個月對各賬號的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行一次備份，存檔至其他受控的計算機(jī)中。